研究背景

亞硝胺類雜質屬于ICH M7（R1）《評估和控制藥物中DNA反應性（致突變）雜質以限制潛在致癌風險》指南中提及的"關注隊列"物質；其中根據世界衛生組織公布的致癌物清單，NDMA和NDEA均屬于2A類致癌物質，因此亞硝胺類（NDMA和NDEA）雜質應在藥品中予以嚴格控制，基因毒性雜質由于控制限度低，基質復雜，需要開發和使用高靈敏度高選擇性的定量檢測方法。本方案在文獻基礎上^[1][2][3]，開發建立了基于APCI源的LC-MS/MS方法，用于痕量的NDMA和NDEA分析檢測，該方法具有準確、靈敏、快速的特點。

實驗部分

儀器、試劑與材料

·Thermo Scientific? Vanquish?超高效液相色譜

·Thermo Scientific? TSQ Altis?三重四極桿質譜，配APCI源

·Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18, 3.0 x 150 mm, 2.7 μm

·蒸餾水（屈臣氏）、甲醇、甲酸（色譜純）

實驗方法

色譜條件

色譜柱：Poroshell 120 EC-C18（3.0 x 150 mm, 2.7 μm）

流速：0.40mL/min

柱溫：40℃

進樣量10μL

質譜條件：

離子源參數

SRM掃描模式

結果與討論

儀器靈敏度、線性范圍和精密度

將高濃度標準品逐級稀釋，配制成系列標準曲線(0.2、1、5、10、50、100、200ng/mL)考察儀器靈敏度、重現性和線性范圍。

靈敏度：結果表明NDMA和NDEA的LOD（S/N≥3）均為0.1ng/mL。

線性范圍：NDMA和NDEA在0.2~200ng/mL濃度范圍內呈良好的線性關系。

重現性：結果表明，連續進樣6針，NDMA和NDEA的RSD值＜5%，具有非常好的重現性。

樣品分析

檢測5例客戶樣本，按照本文所建立方法進行分析。由下圖可以看出，NDMA和NDEA得到了比較好的分析結果，各離子通道在掃描時間內不存在干擾峰，可準確定量定性。

結論

本方案建立了基于APCI源的LC-MS/MS分析方法，用于測定NDMA和NDEA。該方法分析速度快，靈敏度高，能夠滿足NDMA和NDEA的分析要求，適合大批量定性和定量分析。

參考文獻：

[1]徐艷梅, 韓彬, 閆凱, 等. 高效液相色譜-串聯質譜法同時檢測irbesartan原料藥及其片劑中3種N-亞硝胺類基因毒性雜質[J]. 藥物分析雜志, 2021, 41(4): 720 - 726.

[2]Fritz S?rgj, Martina Kinzig, Mona Abdel - Tawab, et al. The contamination of valsartan and other sartans, part 1: New findings[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2019, 172: 395 - 405.

[3]Yamamoto, E., Kan-no, H., Tomita, N., Ando, D., Miyazaki, T., & Izutsu, K. (2022). Isolation of N-nitrosodimethylamine from drug substances using solid-phase extraction-liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 210, 114561.